Вивчення стану гетерохроматину в ядрах клітин букального епітелію після навантаження антигенами B.pertussis, отриманими в різних частотних діапазонах ультразвуку

Abstract

Проведено вивчення показників стану гетерохроматину в інтерфазних ядрах клітин букального епітелію після навантаження антигенами B.pertussis. Оцінка стабільності гетерохроматину в інтер- фазних ядрах клітин букального епітелію під час застосування антигенів кашлюкового мікробу, виділених в різних частотних діапазонах ультразвуку (низькі - 60 кГц, середні - 130 кГц, високі - 1,6 мГц) показала збільшення показників всіх дослідних груп відносно контрольних значень Достовірної різниці показників кількості гетерохроматину в ядрах клітин букального епітелію після наванта- ження очищеними антигенами з молекулярними масами ≥ 1000 кДа та ~3,0 кДа між собою (всі частотні діапазони ультразвуку) не встановлено. Достовірне збільшення кількості гетерохроматину спостерігалось після взаємодії букального епітелію з безклітинними препаратами з молекулярною масою ~8,1 кДа, отриманими в середньочастотному діапазоні ультразвуку (130 кГц) відносно ін- ших фракцій. Даний метод чутливий до антигенних навантажень та може бути використано в якості додаткового тесту при оцінці шкідливості кашлюкових вакцинних препаратів-кандидатів.

Проведено изучение показателей состояния гетерохроматина в интерфазных ядрах клеток буккального эпителия после нагрузки антигенами B.pertussis. Оценка стабильности гетерохроматина в интерфазных ядрах клеток буккального эпителия при применении (во время использования) антигенов коклюшного микроба, выделенных в разных частотных диапазонах ультразвука (низкие - 60 кГц, средние - 130 кГц, высокие - 1,6 мГц) показала увеличение показателей всех опытных групп относительно контрольных значений. Достоверной разницы показателей количества гетерохромати- на в ядрах клеток буккального эпителия после нагрузки очищенными антигенами с молекулярными массами ≥ 1000 кДа и ~ 3,0 кДа между собой (все частотные диапазоны ультразвука) не установле- но. Достоверное увеличение количества гетерохроматина наблюдалось после взаимодействия буккального эпителия с бесклеточными препаратами с молекулярной массой ~ 8,1 кДа, полученными в среднечастотном диапазоне ультразвука (130 кГц) относительно других фракций. Данный метод чувствителен к антигенных нагрузкам и может быть использован в качестве дополнительного теста при оценке вредности коклюшных вакцинных препаратов-кандидатов.

While carrying out series of experiments we supposed that mild re-ceptor interaction between pertussis pathogen antigens and epithelial cells can effect the functional activity of the test-cells, have an impact on the nucleus chromatin structure that would help to use this method as an additional test for evaluating the harmfulness of pertussis vaccine candidate drugs. The goal of this work was to study the influence of B.pertussis anti-genic fractions on heterochromatin structure of interphase nuclei of buccal epithelium. Obtaining the native antigen was carried out by ultrasound disinte-gration in different frequency ranges of Bordetella pertussis industrial strains № 267 and № 475: the low-frequency (frequency of 60 kHz, power of 5 W), medium-frequency (frequency of 130 kHz, power of 9 W), high-frequency (frequency 1,6 MHz, power of 3 W), followed by desintegrate centrifugation (18000g), filtration, concentration and frac-tionation of antigenic complex into separate fractions by gel - chroma-tography. Assessment of the heterochromatin stability in the buccal epithelium of nuclei cells after adding each individual B.pertussis antigen was per-formed as follows. We got buccal epithelium from the inner surface of the healthy adult human cheek and placed it to the buffer solution. We added experimental preparations (1: 1 by volume) to epithelial cell sus-pension and physiological solution of sodium chloride to the control sample. We kept it for 4 hours, then made preparations on a slide and tinted with 2% orcein for 30-60 minutes. Under the light microscope we counted the number of heterochromatin granulas in 30 epithelial cell nuclei. Evaluation of heterochromatin stability in interphase nuclei of buc-cal epithelium during applying pertussis antigen microbes extracted in different frequency ranges of ultrasound (low - 60 kHz, average - 130 kHz, high - 1.6 мHz) showed growth of figures in all experimental groups comparatively to control values. There was not found reliable difference in the amount of heterochromatin in the nuclei of buccal epi-thelium cells after adding purified antigens with molecular weight ≥ 1000 kDa and ~ 3.0 kDa between each other (all frequency ranges of ultrasound). Reliable increase in the number of heterochromatin com-paratively to other fractions was seen after interaction of buccal epithe-lium with cell-free preparations of molecular weight ~ 8.1 kDa obtained in the medium frequency range of ultrasound (130 kHz). This method is sensitive to adding the antigen and can be used as an additional test for evaluating the harmfulness of candidate drugs of pertussis vaccine.