Дослідження асоціації гаплотипів гена вітамін К-епоксид редуктази (VKORC1) з ішемічним атеротромботичним інсультом

Abstract

Метою представленої роботи було встановлення можливого зв’язку гаплотипів гена VKORC1, утвореними за поліморфізмами G- 1639A та C1173T, з ризиком розвитку ішемічного атеротромботичного інсульту (ІАТІ). Матеріали і методи. Для дослідження була використана венозна кров 170 хворих з ІАТІ (42,4 % жінок і 57,6 % чоловіків) та 124 осіб без інфаркту головного мозку (контрольна група). Визначення G-1639A (rs9923231) поліморфізму промотора та С1173Т (rs9934438) поліморфізму першого інтрона гена VKORC1 проведене за допомогою методу полімеразної ланцюгової реакції з наступним аналізом довжини рестрикційних фрагментів. Аналіз нерівноваженого зчеплення та розрахунок частоти гаплотипів здійснений за допомогою програми Arlequin (версія 3.1). Результати. Отримані дані демонструють, що G-1639A поліморфізм гена VKORC1 пов'язаний з розвитком ІАТІ в українській популяції. Встановлено, що у носіїв мінорного A-алеля ризик розвитку ішемічного інсульту був більшим, ніж в осіб з G/G генотипом (OR = 1,905; Р = 0,009). Разом з цим виявлено, що гаплотипи - 1639G/1173T та -1639A/1173C у хворих з ІАТІ зустрічались достовірно частіше, ніж в контролі (OR = 3,813; P = 0,010 та OR = 2,189; P = 0,011, відповідно), а частота гаплотипу -1639G/1173C була вищою серед представників відносно здорових осіб (OR = 0,548; P < 0,001). Різниця в частоті гаплотипу -1639A/1173T серед груп порівняння виявлена не була (P = 0,218). Висновок. Гаплотипи -1639G/1173T та -1639A/1173C пов’язані зі збільшенням ризику ІАТІ, а гаплотип -1639G/1173C є протективним фактором щодо настання ішемічного інсульту.

Целью представленной работы было установление возможной связи гаплотипов гена VKORC1, образованными полиморфизмами G-1639A и C1173T, с риском развития ишемического атеротромботического инсульта (ИАТИ). Материалы и методы. Для исследования была использована венозная кровь 170 больных с ИАТИ (42,4 % женщин и 57,6 % мужчин) и 124 индивидуумов без инфаркта головного мозга (контрольная группа). Определение G-1639A (rs9923231) полиморфизма промотора и С1173Т (rs9934438) полиморфизма первого интрона гена VKORC1 выполнено с помощью метода полимеразной цепной реакции с последующим анализом длины рестрикционных фрагментов. Анализ неравновсеного сцепления и расчет частоты гаплотипов осуществлен с помощью программы Arlequin (версия 3.1). Результаты. Полученные данные показывают, что G-1639A полиморфизм гена VKORC1 связан с развитием ИАТИ в украинской популяции. Установлено, что у носителей минорного A-аллеля риск развития ишемического инсульта был больше, чем у лиц с G/G генотипом (OR = 1,905; Р = 0,009). Вместе с этим установлено, что гаплотипы -1639G /1173T и -1639A/1173C у больных с ИАТИ встречались достоверно чаще, нежели в контроле (OR = 3,813; P = 0,010 и OR = 2,189; P = 0,011, соответственно), а частота гаплотипа -1639G/1173C была выше среди представителей относительно здоровых лиц (OR = 0,548; P <0,001). Разница в частоте гаплотипа - 1639A/1173T среди групп сравнения обнаружена не была (P = 0,218). Вывод. Гаплотипы -1639G/1173T и -1639A/1173C связаны с увеличением риска ИАТИ, а гаплотип -1639G/1173C является протективным фактором относительно наступления развития ишемического инсульта.

Introduction. Ischemic atherothrombotic stroke (IAS) is a multifactorial disease which development is determined by environmental and genetic factors. In recent years, a large number SNPs of various potential candidate-genes have been investigated to establish their association with IAS. However, haplotype analysis is considered more effective than single nucleotide polymorphism analysis to search for genetic determinants of widespread diseases or human features. Thus, the purpose of the present study was the conduction of a case-control study on representatives of the North-Eastern region of Ukraine in order to assess the possible association of vitamin K epoxide reductase complex subunit 1 (VKORC1) gene haplotypes with IAS. Materials and methods. The study group included 170 unrelated Ukrainian patients with a mean age of 64.7 ± 0.73 years who had IAS. The control group consisted of 124 individuals with the absence of cardio-vascular pathologies. VKORC1 promoter G-1639A (rs9923231) and first intron C1173T (rs9934438) polymorphisms genotyping was performed using PCR-RFLP (polymerase chain reaction with following restriction fragment length polymorphism analysis) method. Most statistical analyses were performed using Statistical Package for Social Science software (SPSS, version 17.0, Chicago, IL, USA). Linkage disequilibrium (LD) and haplotype frequencies were analyzed by Arlequin (version 3.1, Bern, University of Berne, Switzerland). All statistical tests were two-sided, P <0.05 was considered significant. Results. The data obtained in present work demonstrated that VKORC1 G-1639A but not C1173T polymorphism was associated with IAS in Ukrainian population. It has been shown that the risk for IAS in patients with A/A and G/A genotypes was higher than for individuals with G/G genotype (OR = 1.905; Р = 0.009). Haplotype analysis demonstrated, that -1639G/1173T and -1639A/1173C haplotypes frequencies in stroke subjects was significant higher than in matched control (OR = 3.813, P = 0.010 and OR = 2.189, P = 0.011, respectively). In contrast, - 1639G/1173C haplotype frequency was higher in the control group (OR = 0.548, P < 0.001). Frequency of -1639A/1173T haplotype in both groups was similar (P = 0.218). Conclusion. VKORC1 -1639G/1173T and -1639A/1173C haplotypes is related to increased risk for IAS, while -1639G/1173C is a protective factor for IAS in Ukrainian population.