Визначення некультурабельного стану ентеробактерій за ознакою електрохімічної активності

Abstract

Під впливом оточуючого середовища бактерії з патогенними властивостями можуть переходити в життєздатний, але некультурабельний стан, який характеризується неспроможністю мікроорганізмів до росту in vitro. Показник оцінки життєздатності мікроорганізмів є достатньо залежним від особливостей використаного методу і суб’єктивного чинника, тому стає більш актуальним точний кількісний аналіз життєздатних бактерій у досліджуваному матеріалі. Задачею даного дослідження стала розробка методики визначення некультурабельного стану бактерій E. coli, S. sonnei, S. flexneri, S. enteritidis , спричиненого дією біоциду - гіпохлориту натрію методом флюоресцентної мікроскопії на мембранних фільтрах із застосуванням флюорохромів родамін 123 для ідентифікації життєздатних клітин та йодиду пропідію, як індикатора неживих клітин. Результати досліджень показали, що навіть через 300 секунд дії біоциду у дозі 1мг/л активного хлору ще вдається виявляти життєздатні мікроорганізми, в той час, як при стандартному методі висіву на тверде поживне середовище культурабельність E. coli, S. enteritidis спостерігається тільки після 10 секундної дії біоциду вказаної концентрації, а S. sonnei та S. flexneri за зазначених умов взагалі не проявляють росту. Всі досліджені мікроорганізми, культивовані при температурі 20 оС, виявилися більш стійкими до дії біоциду, ніж культивовані при 37 оС.

Под влиянием окружающей среды бактерии с патогенными свойствами могут переходить в жизнеспособное, но некультурабельное состояние, характеризующееся неспособностью микроорганизмов к росту in vitro. Показатель оценки жизнеспособности микроорганизмов существенно зависим от особенностей использованного метода и субъективного фактора, поэтому становится более актуальным точный количественный анализ жизнеспособных бактерий в исследуемом материале. Задачей данного исследования стала разработка методики определения некультурабельного состояния бактерий E. coli, S. sonnei, S. flexneri, S. enteritidis, вызванного действием гипохлорита натрия методом флюоресцентной микроскопии на мембранных фильтрах с применением флюорохромов родамин 123 для идентификации жизнеспособных клеток и йодида пропидия, как индикатора неживых клеток. Результаты исследований показали, что даже через 300 секунд действия биоцида в дозе 1 мг/л активного хлора еще удается выявлять жизнеспособные микроорганизмы, в то время, как при стандартном методе высева на твердую питательную среду культурабельность E. coli, S. enteritidis наблюдается только после 10 секундного действия биоцида указанной концентрации, а S. sonnei и S. flexneri при указанных условиях вообще не проявляют роста. Все исследованные микроорганизмы, культивируемые при температуре 20 °С, оказались более устойчивыми к действию биоцида, чем культивируемые при 37 °С.

Under the influence of the environment pathogenic bacteria may become viable, but nonculturable characterized by the inability of microorganisms to grow in vitro. Indicator assessing the viability of microorganisms enough depends on the characteristics of the method used and the subjective factor, so it becomes more urgent precise quantitative analysis of viable bacteria in the material. The objective of this study was to develop methods for determining the status nonculturable bacteria E. coli, S. sonnei, S. flexneri, S. enteritidis, caused by the action of a biocide - sodium hypochlorite by fluorescence microscopy on membrane filters using fluorochromes rhodamine 123 to identify viable cells and propidium iodide, as an indicator of non-living cells. Research has shown that even after 300 seconds in the biocide action of 1 mg/l of active chlorine still possible to identify viable microorganisms, while under the standard method for seeding onto solid medium the culturability E. coli and S. enteritidis was observed only after 10 second action said biocide concentration, S. sonnei and S. flexneri under these conditions did not show the growth. All tested microorganisms cultured at 20°C, proved to be more resistant to biocide than cultured at 37 °C.